Zestaw testowy Human Anti HIV 1 i 2 Elisa na ludzki wirus niedoboru odporności

3. PROCEDURA BADANIA

• Przed użyciem odczekaj, aż wszystkie składniki osiągną temperaturę pokojową.Rozcieńczyć stężony bufor do płukania 1:20 ddH2O.
• Ustaw dwie pozytywne i trzy negatywne kontrole.Dodać 100 μl kontroli pozytywnej (HIV-1 i HIV-2) oraz kontroli negatywnej w dwóch powtórzeniach do odpowiednich dołków bez rozcieńczalnika próbki.Ustaw jedną pustą studzienkę jako kontrolę tła bez dodawania płynu.Dodać 50 μl rozcieńczalnika do próbek do każdego dołka testowego, dodać 50 μl surowicy testowej lub osocza do dołków testowych dokładnie wymieszać.
• Umieść płytkę do mikromiareczkowania w nawilżanym pudełku i inkubuj w 37°C przez 30 min.
• Wyrzucić roztwór reakcyjny i dodać 350 μl rozcieńczonego buforu do płukania do każdego dołka.Wyrzuć bufor do płukania po namoczeniu przez 15-30 sekund.Powtórz procedurę płukania 5 razy, a następnie energicznie odwróć płytkę, aby usunąć całą wodę i zablokować brzeg dołków na papierze chłonnym na kilka sekund.
• Dodaj 100 μl koniugatu enzymu do każdego dołka.Wymieszać delikatnie, obracając płytkę do mikromiareczkowania na płaskiej ławce przez 1 min.Nie dodawaj koniugatu enzymu do pustej studzienki..
• Umieść płytkę do mikromiareczkowania w nawilżanym pudełku i inkubuj w 37°C przez 30 min.
• Przemyj każdą studzienkę 5 razy, wypełniając każdą studzienkę rozcieńczonym 1X buforem do płukania, a następnie energicznie odwracając płytkę, aby usunąć całą wodę i zablokować brzegi studzienek na papierze chłonnym na kilka sekund.
• Dodaj 50 μl Roztworu Substratu A (substrat HRP) do każdego dołka, a następnie dodaj 50 μl Roztworu Substratu B (TMB) do każdego dołka.Delikatnie wymieszać i inkubować w 37°C przez 15 min.
• Dodaj jedną kroplę (50 μl) roztworu zatrzymującego do każdego dołka, aby zatrzymać reakcję barwną.
• Odczytać wartość OD przy 450 nm/630 nm za pomocą czytnika płytek z dwoma filtrami.Istnieje możliwość odczytu wartości OD przy 450 nm za pomocą czytnika płytek z jednym filtrem.(używając wartości OD ślepej studzienki, aby skorygować wszystkie odczyty OD ze wszystkich studzienek)