Pasek testowy Elisa LH ISO13485 Zestaw testowy hormonu luteinizującego 96 sztuk

LH Elisa Kit Hormon luteinizujący

1. Przeznaczenie

Test immunologiczny do ilościowego oznaczania in vitro hormonu luteinizującego w ludzkiej surowicy.

2. Podsumowanie

• LH (hormon luteinizujący) wraz z FSH (hormon folikulotropowy), należy do rodziny gonadotropin.LH i FSH regulują i stymulują wzrost i funkcja gonad (jajników i jąder) synergistycznie.Jak FSH, TSH i hCG, LH to glikoproteina składająca się z dwóch podjednostek (łańcuchy α i β).(1, 2, 3) Ten proteohormon, który składa się ze 121 aminokwasów i trzech łańcuchów cukrowych, ma masę cząsteczkową 29500 daltonów.U kobiet gonadotropiny działają w obrębie obwodu regulacyjnego podwzgórze-przysadka-jajnik, aby kontrolować cykl menstruacyjny.
• LH i FSH są uwalniane impulsowo z komórek gonadotropowych przedniego płata przysadki i przechodzą przez krwioobieg do jajników.Tutaj gonadotropiny stymulują wzrost i dojrzewanie pęcherzyka, a tym samym biosyntezę estrogenów i progesteronów.Najwyższe stężenia LH występują w szczycie cyklu środkowego i wywołują owulację oraz tworzenie ciałka żółtego, którego głównym produktem wydzielania jest progesteron.W komórkach Leydiga jąder LH stymuluje produkcję testosteronu.Oznaczanie stężenia LH służy do wyjaśniania dysfunkcji w obrębie układu podwzgórze-przysadka-gonady.Wyznaczanie LH w połączeniu z FSH stosuje się w następujących wskazaniach: choroby wrodzone z aberracją chromosomową (np. zespół Turnera), policystyczne jajniki (PCO), wyjaśnianie przyczyn braku miesiączki, zespół menopauzalny i podejrzenie niewydolności komórek Leydiga.(1, 4, 5)

3. Zasada testu

Zasada kanapki.Całkowity czas trwania testu: 80 minut.

• Próbka, mikrostudzienki pokryte anty-LH i anty-LH znakowane enzymem są połączone.

• Podczas inkubacji LH obecny w próbce może reagować

jednocześnie z dwoma przeciwciałami, w wyniku czego cząsteczki LH są

umieszczone pomiędzy fazą stałą a przeciwciałami związanymi z enzymem.

• Po przemyciu, w wyniku reakcji immunologicznych, pomiędzy fazą stałą, LH w próbce i przeciwciałami związanymi z enzymem powstaje kompleks.

• Roztwór substratu jest następnie dodawany i katalizowany przez ten kompleks, co powoduje reakcję chromogenną.Powstała reakcja chromogenna jest mierzona jako absorbancja.

• Absorbancja jest proporcjonalna do ilości LH w próbce.

Odczynniki

Dostarczone materiały

• Powlekana mikropłytka, 8 x 12 pasków, 96 studzienek, wstępnie pokryta mysim monoklonalnym

Anty-LH.

• Kalibratory, 6 fiolek po 1 ml, gotowe do użycia;Stężenia: 0(A), 5(B), 20(C), 50(D), 100(E) i 200(F) mIU/ml.

• Koniugat enzymatyczny, 1 fiolka, 11 ml mysiego przeciwciała monoklonalnego anty-LH znakowanego HRP (peroksydaza chrzanowa) w buforze Tris-NaCl zawierającym BSA (albumina surowicy bydlęcej).Zawiera 0,1% konserwant ProClin300.

• Substrat, 1 fiolka, 11 ml, gotowy do użycia, (tetrametylobenzydyna) TMB.

• Roztwór zatrzymujący reakcję, 1 fiolka, 6,0 ml 1 mol/L kwasu siarkowego.

• Koncentrat roztworu do płukania, 1 fiolka, 25 ml (stężony 40X), PBS-Tween

roztwór do mycia.

• IFU, 1 kopia.

• Pokrywka do talerza: 1 sztuka.

Wymagane materiały (ale nie dostarczone)

• Czytnik mikropłytek o zdolności pochłaniania fal 450nm i 620nm.

• Myjka do mikropłytek.

• Inkubator

4. Procedura testowa

• Używaj tylko wymaganej liczby dołków i sformatuj dołki mikropłytek na

każdy kalibrator i próbka do analizy.

• Dodaj 25 μl kalibratorów lub próbek do każdego dołka.

• Dodaj 100 µl koniugatu enzymu do każdego dołka.

• Delikatnie wstrząsać mikropłytką przez 30 sekund, aby wymieszać.

• Przykryj płytkę pokrywką i inkubuj w 37 °C przez 60 minut.

• Wyrzucić zawartość mikropłytki przez dekantację lub aspirację.Jeśli

zdekantować, postukać i osuszyć płytkę chłonnym papierem.

• Dodać 350 μl roztworu do płukania, zdekantować (ostukać i osuszyć) lub zaaspirować.Powtórz 4 dodatkowe razy, w sumie 5 prań.Można zastosować automatyczną myjkę pasków do mikropłytek.Pod koniec mycia odwrócić płytkę i wytrzepać resztki roztworu myjącego na bibułę chłonną.

• Dodaj 100 µl substratu do każdego dołka.

• Inkubować w temperaturze otoczenia (18-25℃) w ciemności w celu przeprowadzenia reakcji przez 20 minut.Nie wstrząsać płytki po dodaniu substanu.

• Dodaj 50 μl roztworu zatrzymującego reakcję do każdego dołka.

• Wstrząsaj przez 15-20 sekund, aby wymieszać płyn w dołkach.Ważne jest, aby

upewnij się, że niebieski kolor zmienił się całkowicie na żółty.

• Odczytaj absorbancję każdego dołka przy 450 nm (używając 620 do 630 nm jako

referencyjnej długości fali w celu zminimalizowania niedoskonałości dołków) w czytniku mikropłytek.