EBV-VCA IgA Ab Test Zestaw ELISA Test enzymatyczny Test osocza Próbka osocza

Zestaw EBV-VCA IgA Ab ELISA Nr katalogowy: BE501A
Test immunoenzymatyczny do wykrywania przeciwciał IgA przeciwko wirusowemu antygenowi kapsydu (VCA) wirusa Epsteina-Barra (EBV).
 
1. ZASADA TESTU
Zestaw EBV-VCA IgA Ab ELISA wykorzystuje system wykrywania, w którym studzienki mikropłytek są pokryte rekombinowanym antygenem odpowiadającym wysoce antygenowemu segmentowi EBV-VCA.Próbki surowicy lub osocza, kontrole są dodawane do dołków.Podczas inkubacji przeciwciała IgA swoiste dla EBV-VCA obecne w próbce wiążą się z rekombinowanym antygenem utrwalonym w studzienkach mikropłytki.Studzienki są płukane w celu usunięcia niezwiązanych materiałów, a koniugat anty-ludzkiej peroksydazy IgA zwiąże się z kompleksem antygen-przeciwciało, a nadmiar niezwiązanych koniugatów enzymu jest ponownie usuwany przez płukanie.Substrat enzymu, tetrametylobenzydyna (TMB), jest dodawany po inkubacji, substrat zostanie zhydrolizowany przez związany enzym, aw studzienkach zawierających przeciwciała EBV-VCA IgA pojawi się niebieski lub niebiesko-zielony kolor.Reakcja enzymatyczna zostaje zatrzymana przez dodanie kwasu siarkowego.Intensywność wytworzonego koloru jest odczytywana spektrofotometrycznie przy 450 nm (450 nm/630 nm) i jest proporcjonalna do ilości przeciwciał obecnych w próbce.
ODCZYNNIKI
 
2. Materiały dostarczone z zestawami:

 
3. PROCEDURA BADANIA

1. Doprowadzić zestaw ELISA (wszystkie odczynniki) i próbki do temperatury pokojowej przed użyciem (około 30 minut).
2. Rozcieńczyć stężony bufor do płukania 1:19 ddH2O.Na przykład 5 ml koncentratu buforu do płukania należy rozcieńczyć do całkowitej objętości 100 ml wodą dejonizowaną lub destylowaną.
3. Dla każdego testu ustawić jedną pustą studzienkę jako kontrolę tła, dwie kontrole pozytywne i trzy kontrole negatywne.Dodać 100 ml kontroli pozytywnej i kontroli negatywnej w dwóch powtórzeniach do poszczególnych studzienek.Do dołka próby ślepej nie należy dodawać ani próbek, ani koniugatu HRP.
4. Dodać 100 ml rozcieńczenia próbki do poszczególnych dołków testowych z wyjątkiem kontroli.
5. Dodać 10 ml każdej próbki testowej do studzienek testowych;wirować do wymieszania.
6. Inkubuj przez 30 minut w 37°C
7. Przemyj każdą studzienkę 5 razy, wypełniając każdą studzienkę rozcieńczonym buforem do płukania, a następnie energicznie odwracając płytkę, aby usunąć całą wodę i zablokować brzegi studzienek na papierze chłonnym na kilka sekund.
8. Dodaj 100ml koniugatu enzymu do każdego dołka.Wymieszaj delikatnie, obracając płytkę do mikromiareczkowania na płaskiej ławce przez 1 minutę.Nie dodawać koniugatu enzymu do pustej studzienki.
9. Inkubuj przez 20 minut w 37°C
10. Umyj płytkę 5 razy jak w kroku 7.
11. Dodać jedną kroplę (50 ml) Roztworu Substratu A (substrat HRP) do każdego dołka, następnie dodać jedną kroplę (50 ml) Roztworu Substratu B (TMB) do każdego dołka.Delikatnie wymieszać i inkubować w 37°C przez 30 minut..
12. Dodaj jedną kroplę (50 ml) roztworu zatrzymującego do każdego dołka, aby zatrzymać reakcję barwną.Odczytać wartość OD przy 450 nm/630 nm za pomocą czytnika płytek z dwoma filtrami.Istnieje możliwość odczytu wartości OD przy 450 nm za pomocą czytnika płytek z jednym filtrem.(używając wartości OD ślepej studzienki, aby skorygować wszystkie odczyty OD ze wszystkich studzienek)