ISO Thyroxine T4 Elisa Test Bezpłatny test surowicy T4 110 minut Czas odczytu

T4 tyroksyna
REF: DS177703 96 testów

1. Przeznaczenie
Test immunologiczny do ilościowego oznaczania in vitro tyroksyny w surowicy ludzkiej.

2. Podsumowanie
Hormon tyroksyna (T4) jest głównym produktem wydzielanym przez tarczycę i stanowi integralny składnik układu regulującego podwzgórze-przednia przysadka-tarczyca.Pełni funkcję anabolicznie wpływając na metabolizm.Tyroksyna powstaje w reakcji sprzęgania dwóch cząsteczek DIT (3,5-dijodotyrozyny) w tarczycy.Jest przechowywany związany z tyreoglobuliną w świetle pęcherzyków tarczycy i jest wydzielany zgodnie z wymaganiami pod wpływem TSH.(1, 2)Większa część (> 99%) całkowitej tyroksyny (T4) w surowicy występuje w postaci związanej z białkami.Ponieważ stężenia białek transportowych w surowicy podlegają efektom egzogennym i endogennym, przy ocenie stężenia hormonów tarczycy w surowicy należy również uwzględnić stan białek wiążących.Jeśli to zostanie zignorowane, zmiany w białkach wiążących (np. z powodu preparatów zawierających estrogeny, w czasie ciąży lub w obecności zespołu nerczycowego itp.) mogą prowadzić do błędnych ocen stanu metabolicznego tarczycy.(3, 4, 5, 6, 7) Oznaczanie T4 może być wykorzystane w następujących wskazaniach: wykrywanie nadczynności tarczycy, wykrywanie pierwotnej i wtórnej niedoczynności tarczycy oraz monitorowanie leczenia supresyjnego TSH.(8)
Test T4 wykorzystuje zasadę testu kompetycyjnego z przeciwciałem specyficznie skierowanym przeciwko T4.Endogenny T4, uwalniany przez działanie kwasu 8-anilino-1-naftalenosulfonowego (ANS).

3. Odczynniki Dostarczone materiały
• Powlekana mikropłytka, 8 x 12 pasków, 96 studzienek, wstępnie pokryta pochodną T4.
• Kalibratory, 6 fiolek po 1 ml, gotowe do użycia;Stężenia: 0(A), 2,5(B), 5(C), 10(D), 15(E) i 30(F) μg/dl.
• Koniugat enzymu, 1 fiolka, 6,0 ml mysiego monoklonalnego T4 znakowanego HRP (peroksydaza chrzanowa) w buforze Tris-NaCl zawierającym BSA (albumina surowicy bydlęcej).Zawiera 0,2% konserwant ProClin300.ANS 1,5 mg/ml.
• Substrat, 1 fiolka, 11 ml, gotowy do użycia, (tetrametylobenzydyna) TMB.
• Roztwór zatrzymujący, 1 fiolka, 6,0 ml 1 mol/l kwasu siarkowego.
• Koncentrat roztworu do płukania, 1 fiolka, 25 ml (stężony 40X), roztwór do płukania PBS-Tween.
• IFU, 1 kopia.
• Pokrywka do talerza: 1 sztuka.

4. Wymagane materiały (ale nie dostarczone)
• Czytnik mikropłytek o zdolności pochłaniania fal 450nm i 620nm.
• Myjka do mikropłytek.
• Inkubator.
• Wytrząsarka do talerzy.
• Mikropipety i mikropipety wielokanałowe dostarczające 50 μl z dokładnością lepszą niż 1,5%.
• Papier chłonny.
• Woda destylowana

Procedura testowa

Upewnij się, że próbki pacjentów, kalibratory i kontrole mają temperaturę otoczenia (18-25 ℃) przed pomiarem.Wymieszać wszystkie odczynniki przez delikatne odwracanie przed użyciem.

• Należy używać tylko wymaganej liczby dołków i sformatować dołki mikropłytek dla każdego kalibratora i próbki, która ma być oznaczona.• Dodaj 50 µl kalibratorów lub próbek do każdego dołka.

• Dodaj 50 µl koniugatu enzymu do każdego dołka.

• Delikatnie wstrząsać mikropłytką przez 30 sekund, aby wymieszać.

• Przykryj płytkę pokrywką i inkubuj w 37 ℃ przez 60 minut.

• Wyrzucić zawartość mikropłytki przez dekantację lub aspirację.Jeśli dekantujesz, postukaj i osusz płytkę chłonnym papierem.

• Dodać 350 µl roztworu do płukania, zdekantować (ostukać i osuszyć) lub zaaspirować.Powtórz 4 dodatkowe razy, w sumie 5 prań.Można zastosować automatyczną myjkę pasków do mikropłytek.Pod koniec mycia odwrócić płytkę i wytrzepać resztki roztworu myjącego na bibułę chłonną.

• Dodaj 100 µl substratu do każdego dołka.

• Przykryj i inkubuj w temperaturze otoczenia (18-25℃) w ciemności do reakcji przez 20 minut.Nie wstrząsać płytki po dodaniu substanu.• Dodaj 50 µl roztworu zatrzymującego reakcję do każdego dołka.

• Wstrząsaj przez 15-20 sekund, aby wymieszać płyn w dołkach.Ważne jest, aby kolor niebieski zmienił się całkowicie na żółty.

• Odczytaj absorbancję każdego dołka przy 450 nm (stosując 620 do 630 nm jako referencyjną długość fali w celu zminimalizowania niedoskonałości dołków) w czytniku mikropłytek.Wyniki należy odczytać w ciągu 30 minut od dodania roztworu zatrzymującego