BIOVANTION Test przeciwciał przeciw tyreoglobulinie Zestaw testowy anty Tg Ab

ZESTAW TESTOWY ANTY-Tg ELISA Tyroglobulina Ab

1. Przeznaczenie

Test immunologiczny do ilościowego oznaczania in vitro przeciwciał przeciwko tyreoglobulinie w surowicy ludzkiej.Oznaczenie anty-Tg jest wykorzystywane jako pomoc w wykrywaniu autoimmunologicznych chorób tarczycy.

2. Podsumowanie

Tyreoglobulina (Tg) jest wytwarzana w tarczycy i jest głównym składnikiem światła pęcherzyka tarczycy.W synergii z enzymem tarczycowo-specyficznej peroksydazy (TPO), Tg pełni zasadniczą funkcję w jodowaniu L-tyrozyny i tworzeniu hormonów tarczycy T4 i T3.Zarówno Tg, jak i TPO są potencjalnie autoantygenami.

Podwyższone stężenia przeciwciał przeciwko Tg (autoprzeciwciała Tg) w surowicy stwierdza się u osób z autoimmunologicznym zapaleniem tarczycy.Wysokie stężenia anty-Tg razem z anty-TPO wskazują na przewlekłe limfocytarno-naciekowe zapalenie tarczycy (choroba Hashimoto).Częstość występowania przeciwciał przeciwko tyreoglobulinie wynosi około 70-80% u osób z autoimmunologicznym zapaleniem tarczycy, w tym z chorobą Hashimoto i około 30% u osób z chorobą Gravesa-Basedowa. Oznaczenie anty-Tg jest ważne w monitorowaniu przebiegu zapalenia tarczycy Hashimoto i w diagnostyce różnicowej (przypadki podejrzenia autoimmunologicznego zapalenia tarczycy o nieznanym pochodzeniu z ujemnym wynikiem testu anty-TPO, choroba Gravesa-Basedowa bez nacieku limfocytarnego oraz w celu wykluczenia interferencji ze strony autoprzeciwciał Tg w teście Tg).

Chociaż czułość zabiegu można zwiększyć poprzez jednoczesne oznaczenie dodatkowych przeciwciał przeciwtarczycowych (przeciwciała anty-TPO, TSH-receptor-przeciwciała), wynik ujemny nie wyklucza definitywnie obecności choroby autoimmunologicznej.Poziom miana przeciwciał nie koreluje z kliniczną aktywnością choroby.Miana, które są początkowo podwyższone, mogą stać się ujemne, jeśli choroba utrzymuje się przez dłuższy czas lub jeśli

następuje remisja.Jeśli przeciwciała pojawią się ponownie po remisji, prawdopodobny jest nawrót.

Testy immunoabsorpcji enzymatycznej wykorzystują ludzki antygen i królicze przeciwciała antyludzkie IgG (anty-IgG).

3. Odczynniki Dostarczone materiały

• Powlekana mikropłytka, 8 x 12 pasków, 96 dołków.Wstępnie pokryty ludzkim antygenem TG.

• Kalibratory, 6 fiolek po 1 ml, gotowe do użycia;Stężenia: 0(A), 50(B),150(C), 500(D), 1000(E) i 2000(F) IU/ml.

• Koniugat enzymatyczny, 1 fiolka, 11,0 mL znakowanych HRP (peroksydaza chrzanowa) króliczych przeciwciał anty-ludzkich IgG (anty-IgG) w buforze Tris-NaCl zawierającym BSA (albumina surowicy bydlęcej).Zawiera 0,1% konserwant ProClin300.

• Rozcieńczalnik surowicy: 1 fiolka, 11 ml.Zawiera sole buforujące i barwnik

• Koncentrat roztworu do płukania, 1 fiolka, 25 ml (stężony 40X), roztwór do płukania PBS-Tween.

• Substrat, 1 fiolka, 11 ml, gotowy do użycia, (tetrametylobenzydyna) TMB.

• Roztwór zatrzymujący reakcję, 1 fiolka, 6,0 ml 1 mol/l kwasu siarkowego.

• Instrukcja obsługi, 1 kopia.

• Pokrywka talerza: 2 sztuki.

4. Wymagane materiały (ale nie dostarczone)

• Czytnik mikropłytek o zdolności pochłaniania fal 450nm i 620nm.
• Myjka do mikropłytek.
• Inkubator.
• Wytrząsarka do talerzy.
• Mikropipety i mikropipety wielokanałowe dostarczające 50 µl z precyzją lepszą niż 1,5%.
• Papier chłonny.
• Woda destylowana

5. Procedura testowa

• Należy użyć tylko wymaganej liczby dołków i sformatować dołki mikropłytki dla każdego kalibratora i próbki, która ma być oznaczona.

• Do każdego dołka dodać 100 µl kalibratorów.

• Dodać 100 µl rozcieńczalnika do próbek (kolor zielony) do każdego dołka z wyjątkiem dołków kalibratora.

• Dodać 10 µL próbki do każdego dołka rozcieńczalnika próbki (UWAGA: Odczynniki w dołkach zmienią kolor na niebieski z zielonego), a następnie wstrząsnąć przez 30 sekund.

• Przykryj płytkę pokrywką i inkubuj w 37 °C przez 30 minut.

• Wyrzucić zawartość mikropłytki przez dekantację lub aspirację.Jeśli dekantujesz, postukaj i osusz płytkę chłonnym papierem.

• Dodać 350 µl roztworu do płukania, zdekantować (ostukać i osuszyć) lub zaaspirować.Powtórz 4 dodatkowe razy, w sumie 5 prań.Pod koniec mycia odwrócić płytkę i wytrzepać resztki roztworu myjącego na bibułę chłonną.

• Dodać 100 µL koniugatu enzymu,

• Przykryj płytkę pokrywką i inkubuj w 37 °C przez 30 minut

• Dodać 350 µl roztworu do płukania, zdekantować (ostukać i osuszyć) lub zaaspirować.Powtórz 4 dodatkowe razy, w sumie 5 prań.Pod koniec mycia odwrócić płytkę i wytrzepać resztki roztworu myjącego na bibułę chłonną.

• Do każdego dołka dodać 100 µl substratu.Przykryj i inkubuj w temperaturze otoczenia (18-25℃) w ciemności do reakcji przez 10 minut.Nie wstrząsać płytki po dodaniu substanu.

• Do każdego dołka dodać 50 µl roztworu zatrzymującego reakcję.

• Wstrząsaj przez 15-20 sekund, aby wymieszać płyn w dołkach.Ważne jest, aby kolor niebieski zmienił się całkowicie na żółty.

• Odczytać absorbancję każdego dołka przy 450 nm (stosując 620 do 630 nm jako referencyjną długość fali w celu zminimalizowania niedoskonałości dołków) w czytniku mikropłytek.Wyniki należy odczytać w ciągu 30 minut od dodania roztworu zatrzymującego.