Przeciwciało przeciwko wirusowi wirusa zapalenia wątroby typu B (HBcAb)

ELISA TjestKto

Do diagnostyki in vitro i profesjonalnego stosowania.

Nazwa produktu

Zestaw do badań ELISA przeciw HBc (serum/plazma)

Celem zastosowania

Niniejszy zestaw badawczy ELISA przeciw HBc umożliwia jakościowe wykrycie przeciwciał do antygenu rdzeniowego wirusa zapalenia wątroby typu B (HBcAb) w surowicy/ osoczu ludzkim.Odczynnik jest odpowiedni do klinicznego badania przesiewowego i diagnozy zakażenia wirusem zapalenia wątroby typu B w surowicy lub osoczu ludzkim.

Zasada badania

Wirus zapalenia wątroby typu B (HBV) jest kopertą,wirus dwustronnego DNA należący do rodziny Hepadnaviridae i uznawany za główną przyczynę wirusa zapalenia wątroby przenoszonej przez krew wraz z wirusem zapalenia wątroby typu C (HCV)Zakażenie wirusem HBV wywołuje szereg objawów klinicznych, począwszy od łagodnej, niewyraźnej choroby, aż po fulminujące zapalenie wątroby, ciężkie przewlekłe choroby wątroby,które w niektórych przypadkach mogą prowadzić do marskości i raka wątrobyKlasyfikacja zakażenia wirusem zapalenia wątroby typu B wymaga identyfikacji kilku markerów serologicznych wyrażonych w trakcie trzech faz (inkubacji, ostrej i rekonwalescencyjnej) zakażenia.

Głównym składnikiem wirusa jest antygen rdzeniowy wirusa zapalenia wątroby typu B (HBcAg).Ten antygen rdzenia składa się z pojedynczego polipeptydu o masie około 17 kD, który jest uwalniany po rozbiciu cząstek rdzenia.W antygenie występuje co najmniej jeden czynnik immunologiczny.

Wkrótce po wystąpieniu HBsAg pojawiają się przeciwciała przeciwko HBcAg (całkowite przeciwciało przeciw HBc i IgM) i nigdy nie ustępują.zakażenie wirusowym zapaleniem wątroby typu B można zarazić bez immunologicznie wykrywalnych przeciw- HBcBadania przesiewowe anty-HBc pozwalają uzyskać dane na temat częstości występowania zapalenia wątroby typu B w różnych populacjach.przewlekłeWraz z innymi badaniami wirusowego zapalenia wątroby typu B, w celu zidentyfikowania antywirusowego zapalenia wątroby typu B, należy przeprowadzić badanie w celu ustalenia, czy wirus ten występuje lub nie.marker przeciw HBc umożliwia prawidłową diagnozę i właściwe monitorowanie postępu wirusaTesty anty- HBc mogą być jedynym wskaźnikiem zakażenia wirusem zapalenia wątroby typu B (w tym inne testy na pacjentach u których wynik HBsAg jest ujemny).

System badania HBcAb ELISA opiera się na zasadzie konkurencyjności fazy stałej, jednoetapowego inkubacji.konkuruje z monoklonalnym anty-HBc skojugowanym z peroksydazą chrząstki (HRP-Conjugate) o ustaloną ilość oczyszczonego HBcAg wstępnie powlekanego w mikroplatceW przypadku braku przeciwbłonka HBc, HRP-konjugowane przeciwbłonka HBc będzie wiązać się z antygenami wewnątrz studni.Po dodaniu roztworów chromogenów A i B do studni i podczas inkubacjiPo zatrzymaniu reakcji z kwasem siarkowym niebieski kolor zmienia się w żółty. Obecność przeciwciał do HBcAg w próbce wskazuje niski kolor,lub brak koloru w ogóle.

Wymogi dotyczące próbek

1.Zbiórka okazów:Nie jest wymagane specjalne przygotowanie pacjenta. Próbkę należy pobrać zgodnie z normalną praktyką laboratoryjną. W tym badaniu można wykorzystać świeże próbki surowicy lub osocza.Krew pobrana w wyniku kropli żylaków powinna być dopuszczona do naturalnego i całkowitego zakrzepowania. Serum należy oddzielić od zakrzepu tak wcześnie, jak to możliwe, aby uniknąć hemolizy krwinek czerwonych.Należy zadbać o to, aby próbki surowicy/ plazmy były przejrzyste i nie były zanieczyszczone mikroorganizmami.

2.HNie należy wykonywać badań w przypadku próbek z silną lipemią, żółcią lub hemolizą. używaneponieważ mogą one dawać fałszywe wyniki w badaniu.Nie inaktywuj ciepła odmianyPróbki z widocznym zanieczyszczeniem mikrobiologicznym nie powinny być nigdy stosowane.

3. HBcAb ELISA jest przeznaczony wyłącznie do badania poszczególnych próbek surowicy/ plazmy. Nie należy stosować testu do badania próbek zwłok, śliny, moczu lub innych płynów ciała, ani krwi zbiorczej (mieszanej).

4Transport i przechowywanie: Przechowywać próbki w temperaturze 2-8°C. Próbki, które nie są wymagane do badania w ciągu 3 dni, należy przechowywać zamrożone (w temperaturze -20°C lub niższej).Do przewozu, próbki powinny być pakowane i oznakowane zgodnie z obowiązującymi lokalnymi i międzynarodowymi przepisami dotyczącymi transportu próbek klinicznych i czynników etologicznych.

Procedura badania

1Wszystkie odczynniki powinny być dopuszczone do osiągnięcia temperatury pokojowej przez 15 minut przed użyciem.

2. Przed użyciem rozcieńczyć bufor do prania w tempie rozcieńczenia 1:40 wodą destylowaną.

3Próbka powinna odpowiadać liczbie mikroplatek, każda płyta powinna być wyposażona w 3 studnie kontroli ujemnej, 2 studnie kontroli dodatniej i 1 studnię kontroli pustej.(Jeśli wykrywa się z wykrywaniem podwójnej długości fali, nie jest dozwolone ustawianie pustej studni sterującej).

Uwaga: W celu uniknięcia skażenia krzyżowego należy stosować oddzielny końcówek pipety do usuwania dla każdej próbki, kontroli negatywnej i pozytywnej.

4. Dodać próbkę 50 μL do odpowiedniej studni (Jeśli zestaw ten jest stosowany do diagnostyki pomocniczej klinicznej, próbkę do badania należy rozcieńczyć w celu badania zwykłym roztworem fizjologicznym o godzinie 1:30.W przypadku stosowania do badań epidemiologicznych, można wykryć oryginalną próbkę ), dodać 50 μL kontroli ujemnej i kontroli dodatniej do studni kontroli ujemnej i studni kontroli dodatniej.Odpowiednio dodaje się konjugat enzymatyczny 50μL (nie dodaje się w pustym studniu).

5. Wstrząsnąć przez 30 sekund oscylatorem (to bardzo ważny krok). Inkubacja w temperaturze 37 °C przez 30 minut z membranową płytą uszczelniającą płytę.

6. Po zakończeniu inkubacji, usunąć i wyrzucić pokrywę płytki. Wyjąć, dodać bufor do mycia do każdej studni przez 20 sekund. Powtórzyć 5 razy. Po ostatnim cyklu prania,przesuń talerz na papier czysty lub ręcznik, i dotknij, aby usunąć pozostałości.

7. Dodać podłoże A (50μL) i podłoże B (50μL) (nie dodawać do próżnej studni). Mieszanie delikatnie poprzez wstrząsanie. Inkubacja w temperaturze 37 °C przez 15 minut z membrany płyty uszczelniającej płytę.

8. Dodać 50 μL roztworu Stop do każdej studni (nie dodawać do pustej studni).Kalibracja czytnika płytki z Blank dobrze i odczytać absorbancji w 450nm.Jeśli używany jest instrument z podwójnym filtrem, ustawić długość fali odniesienia na 630 nm. Nie wolno ustawić pustych studni, jeśli do wykrywania używa się podwójnej długości fali. Obliczyć wartość odcięcia i ocenić wyniki.