Zestaw badawczy TB-IGRA ELISA

1Zasada

TB- IGRA jestin vitrotest diagnostyczny wykrywający komórkowe reakcje immunologiczne naMycobacterium tuberculosis(MTB) poprzez pomiar interferonu gamma (IFN- γ) uwalnianego przez uczulone komórki T po stymulacji antygenami specyficznymi dla MTB (np. ESAT-6, CFP-10 i TB7. 7).

2. Kluczowe cechy

• Wysoka specyfika:

  • Używa antygenów specyficznych dla MTB (nie występujących w BCG i większości mikobakteriów innych niż gruźlica), minimalizując fałszywe wyniki.

• Wysoka wrażliwość:

  • Wykrywa zarówno aktywną gruźlicę, jak i utajoną zakażenie gruźlicą (LTBI) z wyższą dokładnością w porównaniu z tuberkulinowym testem skórnym (TST).

• Wyniki ilościowe/jakościowe:

  • Wyniki różnią się w zależności od platformy (np. liczba punktów w badaniach ELISPOT lub stężenie IFN-γ w badaniu ELISA).

• Szybkie rozwiązanie: Wyniki zwykle dostępne w24 ∙ 48 godzin.

3Wymagania dotyczące próby

• Rodzaj próbki: Świeża krew całkowita z obwodu (heparynowana).

• ObjętośćZazwyczaj:1 ‰ 3 mlw odniesieniu do każdego badania (różni się w zależności od producenta zestawu).

• Przechowywanie: Proces wewnątrz8 ̇ 32 godziny(w zależności od specyfikacji zestawu).

4Procedura oceny

1. Stymulacja: Inkubacja krwi z antygenami MTB i kontrolą (kontrola negatywna/mitogenna).

2. Wykrycie IFN-γ:

   • oparte na systemie ELISPOT (np. T-SPOT.TB): Licz komórki T wydzielające IFN-γ jako plamy.

   • Na podstawie ELISA (np. złoto QuantiFERON-TB): Zmierzyć stężenie IFN-γ za pomocą badania immunologicznego.

3. Wykładnia:

   • Wyniki porównane z wartościami granicznymi (różnione w zależności od testu).

   • W przypadku nieokreślonych wyników może być konieczne ponowne badanie.

5Metryki wydajności

• Wrażliwość: > 90% dla aktywnej gruźlicy, ~ 80% dla LTBI.

• Specyfikacja: > 95% (bez wpływu szczepień BCG).

• Reakcyjność krzyżowa: minimalne w przypadku mikobakterii innych niż gruźlica (NTM).

6. Wskazania

• Badanie przesiewowe na LTBI w grupach wysokiego ryzyka (np. HIV+, pacjenci z immunosupresją, bliscy kontakty).

• Badanie uzupełniające do diagnostyki aktywnej gruźlicy (muszą korelować z objawami klinicznymi i innymi badaniami).

7Zalety w stosunku do TST

• Brak reaktywności krzyżowej z BCG.

• Badanie jednorazowe (bez zwrotu odczytu).

• Obiektywne wyniki laboratoryjne.

8Ograniczenia

• Nie można odróżnić aktywnej gruźlicy od LTBI.

• Wymaga specjalistycznego sprzętu laboratoryjnego.

• Większe koszty niż TST.

• Potencjalne fałszywe wyniki u pacjentów z osłabionym układem odpornościowym.

9. Kompatybilne zestawy (przykłady)

• T-SPOT.TB(Oxford Immunotec): na bazie ELISPOT.

• QuantiFERON-TB Gold Plus(Qiagen): oparte na ELISA.

10Status regulacyjny

• Zatwierdzone przez FDA/CE/WHO do badań przesiewowych zakażeń gruźlicą.

Diagnostyka in vitro

Tylko do użytku

Ten zestaw zawiera czynniki wystarczające do badania maksymalnie 28 próbek w jednym badaniu.

1Kontrola negatywna (szara pokrywa)

2Antygen przeciw gruźlicy, liofilizowany (fioletowa pokrywa)

3Rozcieńczalnik antygenu gruźlicy (fioletowa pokrywa)

4- Pozytywna kontrola (czerwona pokrywa) 28 testów 28 testów 0,9 ml 28 testów

Komponenty ELISA

1. Mikroplaty

2. ludzkie IFN-γ standardowe, liofilizowane (niebieska czapka)

3Rozcieńczalnik

4Przeciwciało oznaczone biotyną (żółta czapka) 12 x 8 studni 2 x fiolka 1 x 40 ml 1 x 6 ml

5. Konjugat enzymatyczny 100X Koncentrat (brązowa butelka) 1 x 130μL

6. Myj bufor 10X Koncentrat 1 x 40 ml

7Chromogen Roztwór A

8Chromogen Roztwór B

9Zatrzymanie roztworu 1 x 6 ml 1 x 6 ml 1 x 6 ml

Zasada testu