2. Przed użyciem rozcieńczyć bufor płuczący wodą destylowaną w stosunku 1:40.
3. Dodaj 100 µl rozcieńczalnika próbki do odpowiedniego dołka (nie dodawaj do dołka ślepego, wynik ujemny
dołki kontrolne i dołki kontroli pozytywnej.) Próbka powinna odpowiadać liczbie mikro
płytkę, na każdej płytce należy umieścić kontrolę ujemną w 2 dołkach, kontrolę dodatnią w 1 dołku i ślepą próbę
kontroluj 1 dołek. Dodać 5μL próbki do odpowiedniego dołka, dokładnie wymieszać za pomocą pipety, dodać
50 μl kontroli ujemnej i kontroli dodatniej do dołków kontroli ujemnej i dołka kontroli dodatniej (nie wolno
dodać w pustym miejscu).
Uwaga: Do każdej próbki należy używać oddzielnej końcówki pipety, kontroli ujemnej i dodatniej
uniknąć zanieczyszczenia krzyżowego.
4. Delikatnie potrząsaj, aby wymieszać przez 30 s. Inkubować w temperaturze 37°C przez 20 minut z membraną płytki uszczelniającej
uszczelnienie płyty.
5. Po zakończeniu inkubacji zdjąć i wyrzucić pokrywkę płytki. Wyjmij, dodaj bufor płuczący
każdą studzienkę przez 20 sekund. Powtórz 5 razy. Po ostatnim myciu obrócić talerz na drugą stronę
bibułę lub czysty ręcznik i postukaj, aby usunąć pozostałości.
6. Odpowiednio dodając koniugat enzymu 50µL (nie dodawać do dołka ślepego)
7. Inkubować w temperaturze 37°C przez 20 minut z membraną płytki uszczelniającej uszczelniającą płytkę. Powtórz
etap prania 5 razy jak w kroku 5.
8. Dodać Substrat A 50µL i Substrat B 50µL (nie dodawać do dołka ślepego). Inkubować w temperaturze 37 ℃ przez
10 minut z membraną płyty uszczelniającej uszczelniającą płytkę.
9. Dodaj 50 μl roztworu zatrzymującego do każdego dołka (nie dodawaj do dołka ślepego). Delikatnie wymieszać poprzez wstrząsanie, przeczytać
absorbancję w ciągu 10 minut po zatrzymaniu reakcji. Skalibrować czytnik płytek za pomocą ślepej próby
dobrze i odczytaj absorbancję przy 450 nm. Jeżeli używany jest przyrząd z podwójnym filtrem, ustaw wartość odniesienia
długość fali 630 nm. Jeśli do wykrywania używane są dwie długości fali, nie jest dozwolone ustawienie żadnej pustej studzienki. Oblicz
Wartość odcięcia i ocena wyników.
Chronometria: Odczytaj gęstość optyczną (OD) próbki przy 450 nm za pomocą czytnika mikropłytek.
Średnia wartość OD kontroli ujemnej ≤ 0,1 i średnia wartość OD kontroli dodatniej ≥ 0,8, test jest ważny,
w przeciwnym razie test jest nieważny.
Wartość odcięcia (CO) = średnia wartość OD kontroli ujemnej x 3 (obliczona przez 0,10, gdy średnia
Wartość OD kontroli ujemnej wynosi < 0,10, obliczona na podstawie wartości rzeczywistej, gdy średnia OD kontroli ujemnej
wartość wynosi > 0,10)
Wyniki pozytywne: Wartość OD próbki ≥ CO
Twoja wiadomość musi mieć od 20 do 3000 znaków!
Polish
