Wyłącznie do diagnostyki in vitro i użytku profesjonalnego.

Zestaw do testu ELISA Anti-Ct IgG (surowica/osocze)

Niniejszy zestaw służy do jakościowego wykrywania przeciwciał IgG przeciwko Chlamydia trachomatis (Ct) w ludzkiej surowicy/osoczu. Zestaw jest przeznaczony do przesiewowego badania klinicznego i diagnostyki infekcji Ct w surowicy/osoczu.

Antygen Ct jest unieruchomiony na stałej fazie w mikropłytce reakcyjnej z polistyrenu. Jeśli w próbce testowej obecne są przeciwciała IgG przeciwko Ct, wiążą się one z antygenem Ct pokrywającym mikropłytkę, tworząc kompleks antygen-przeciwciało, a następnie wiążą się z przeciwciałem sprzężonym z enzymem, tworząc kompleks antygen-przeciwciało-przeciwciało na powierzchni mikropłytki, a pod wpływem działania substratu w odpowiedniej studzience pojawia się niebieskie zabarwienie. W związku z tym można specyficznie wykryć przeciwciała IgG przeciwko Ct w ludzkiej surowicy/osoczu.

1. Przed użyciem wszystkie odczynniki należy doprowadzić do temperatury pokojowej przez 15 minut.

2. Bufor do przemywania należy rozcieńczyć wodą destylowaną w stosunku 1:40 przed użyciem.

3. Do odpowiednich studzienek należy dodać 100 µL rozcieńczalnika do próbek (Nie dodawać do studzienki kontroli negatywnej, kontroli pozytywnej i studzienki pustej). Próbka powinna odpowiadać liczbie studzienek na mikropłytce, każda płytka powinna być wyposażona w 2 studzienki kontroli negatywnej, 1 studzienkę kontroli pozytywnej i 1 studzienkę kontroli pustej. Do studzienek kontroli negatywnej i studzienki kontroli pozytywnej należy dodać 5 µL próbki, dokładnie wymieszać pipetą, dodać 50 µL kontroli negatywnej i pozytywnej do studzienek kontroli negatywnej i studzienki kontroli pozytywnej (Nie dodawać do studzienki pustej).

Uwaga: Należy używać oddzielnej, jednorazowej końcówki pipety dla każdej próbki, kontroli negatywnej i pozytywnej, aby uniknąć zanieczyszczenia krzyżowego.

4. Delikatnie wstrząsnąć w celu wymieszania przez 30 sekund. Inkubować w temperaturze 37°C przez 20 minut, zamykając płytkę membraną uszczelniającą.

5. Po zakończeniu inkubacji usunąć i wyrzucić pokrywę płytki. Wyjąć, dodać bufor do przemywania do każdej studzienki na 20 sekund. Powtórzyć 5 razy. Po ostatnim cyklu przemywania odwrócić płytkę na papier chłonny lub czysty ręcznik i postukać, aby usunąć wszelkie pozostałości.

6. Dodać odpowiednio 50 µL koniugatu enzymatycznego (Nie dodawać do studzienki pustej).

7. Inkubować w temperaturze 37°C przez 20 minut, zamykając płytkę membraną uszczelniającą. Powtórzyć krok przemywania 5 razy, jak w kroku 5.

8. Dodać 50 µL substratu A i 50 µL substratu B (Nie dodawać do studzienki pustej). Inkubować w temperaturze 37°C przez 10 minut, zamykając płytkę membraną uszczelniającą.

9. Dodać 50 µL roztworu zatrzymującego reakcję do każdej studzienki (Nie dodawać do studzienki pustej). Delikatnie wymieszać przez wstrząsanie, odczytać absorbancję w ciągu 10 minut po zatrzymaniu reakcji. Skalibrować czytnik płytek ze studzienką pustą i odczytać absorbancję przy 450 nm. W przypadku użycia urządzenia z podwójnym filtrem, ustawić długość fali odniesienia na 630 nm. Nie wolno używać studzienki pustej przy detekcji dwudługofalowej. Obliczyć wartość graniczną i ocenić wyniki.

Chronometria: Odczytać gęstość optyczną (OD) próbki przy 450 nm za pomocą czytnika mikropłytek.

Średnia wartość OD kontroli negatywnej ≤ 0,1 i średnia wartość OD kontroli pozytywnej ≥ 0,8, test jest ważny, w przeciwnym razie test jest nieważny.

Wartość graniczna (C.O.) = Średnia wartość OD kontroli negatywnej x 3 (Obliczona jako 0,10, gdy średnia wartość OD kontroli negatywnej wynosi 0,10)

Wyniki pozytywne: Wartość OD próbki ≥ C.O.