|
Szczegóły Produktu:
|
| Zamiar: | WYŁĄCZNIE do celów badawczych | Magazynowanie: | 2-8 ℃ |
|---|---|---|---|
| Specyfikacja: | 48 studzienek/96 studzienek | metoda: | Kanapka |
| Cat. Kot. No. Nie.: | W-Mo1153 | CV(%): | SD/średnia X100 |
| Podkreślić: | E Cadherin Elisa Kit,Mysz E Cad Elisa Kit,Research E Cadherin Elisa Kit |
||
Mysz E-Cadherin, E-Cad ELISA Kit
Ten zestaw ELISA wykorzystuje metodę Sandwich-ELISA.Dostarczona w tym zestawie płytka Microelisa została wstępnie pokryta przeciwciałem specyficznym dla E-Cad.Standardy lub próbki są dodawane do odpowiednich studzienek płytki Microelisa i łączone ze specyficznym przeciwciałem.Następnie do każdego dołka płytki paskowej Microelisa dodaje się przeciwciało skoniugowane z peroksydazą chrzanową (HRP) swoiste dla E-Cad i inkubuje.Wolne składniki są wypłukiwane.Do każdego dołka dodaje się roztwór substratu TMB.Tylko te dołki, które zawierają przeciwciało E-Cad skoniugowane z E-Cad i HRP będą miały kolor niebieski, a następnie zmienią kolor na żółty po dodaniu roztworu zatrzymującego.Gęstość optyczną (OD) mierzy się spektrofotometrycznie przy długości fali 450 nm.Wartość OD jest proporcjonalna do stężenia E-Cad.Możesz obliczyć stężenie E-Cad w próbkach, porównując OD próbek z krzywą standardową.
Materiały dostarczone z zestawem
| Materiały dostarczone z zestawem | 48 oznaczeń | 96 oznaczeń | Magazynowanie | |
| 1 | Instrukcja obsługi | 1 | 1 | RT |
| 2 | Membrana płyty zamykającej | 2 | 2 | RT |
| 3 | Zapieczętowane torby | 1 | 1 | RT |
| 4 | Płytka do usuwania mikroelizy | 1 | 1 | 2-8 ℃ |
| 5 | Standardowo: 108 pg/ml | 0,5 ml × 1 butelka | 0,5 ml × 1 butelka | 2-8 ℃ |
| 6 | Rozcieńczalnik standardowy | 1,5 ml × 1 butelka | 1,5 ml × 1 butelka | 2-8 ℃ |
| 7 | Odczynnik koniugatu HRP | 3 ml × 1 butelka | 6 ml × 1 butelka | 2-8 ℃ |
| 8 | Rozcieńczalnik próbki | 3 ml × 1 butelka | 6 ml × 1 butelka | 2-8 ℃ |
| 9 | Roztwór chromogenu A | 3 ml × 1 butelka | 6 ml × 1 butelka | 2-8 ℃ |
| 10 | Roztwór chromogenu B | 3 ml × 1 butelka | 6 ml × 1 butelka | 2-8 ℃ |
| 11 | Zatrzymaj rozwiązanie | 3 ml × 1 butelka | 6 ml × 1 butelka | 2-8 ℃ |
| 12 | Roztwór myjący | 20 ml (20X) × 1 butelka | 20 ml (30X) × 1 butelka | 2-8 ℃ |
Procedura
Rozcieńczenie standardów
1.Dziesięć dołków jest ustawionych na standardy w płytce do pasków Microelisa.W studzience 1 i studzience 2 dodaje się 100 μl roztworu standardowego i 50 μl buforu rozcieńczenia standardowego i dobrze miesza.W studzience 3 i studzience 4 dodaje się odpowiednio 100 μl roztworu ze studzienki 1 i studzienki 2.Następnie dodaje się 50 μl buforu do rozcieńczeń standardowych i dobrze miesza.50 μl roztworu odrzucono z dołka 3 i dołka 4. Do dołka 5 i dołka 6 dodano odpowiednio 50 μl roztworu z dołka 3 i dołka 4.Następnie dodaje się 50 μl buforu do rozcieńczeń standardowych i dobrze miesza.Do dołka 7 i dołka 8 dodaje się odpowiednio 50 μl roztworu z dołka 5 i dołka 6.Następnie dodaje się 50 μl buforu do rozcieńczeń standardowych i dobrze miesza.W studzience 9 i studzience 10 dodaje się odpowiednio 50 μl roztworu ze studzienki 7 i studzienki 8.Następnie dodaje się 50 μl buforu do rozcieńczeń standardowych i dobrze miesza.50 μl roztworu usuwa się ze studzienek 9 i 10. Po rozcieńczeniu całkowita objętość we wszystkich studzienkach wynosi 50 μl, a stężenia wynoszą odpowiednio 24 ng/ml, 16 ng/ml, 8 ng/ml, 4 ng/ml i 2 ng/ml .
2. W płytce testowej Microelisa pozostawić pusty dołek jako kontrolę ślepą.Do dołków na próbki dodaje się 40 μl buforu rozcieńczającego próbki i 10 μl próbki (współczynnik rozcieńczenia wynosi 5).Próbki należy umieszczać na dnie bez dotykania ścianki studzienki.Dobrze wymieszaj, delikatnie wstrząsając.
3. Inkubacja: inkubuj 30 min w 37 ℃ po uszczelnieniu membraną do płytki zamykającej.
4. Rozcieńczanie: rozcieńczyć stężony bufor do płukania wodą destylowaną (30 razy dla 96T i 20 razy dla 48T).
5. Mycie: ostrożnie odkleić membranę płytki zamykającej, zaaspirować i ponownie napełnić roztworem myjącym.Wyrzucić roztwór myjący po 30 sekundach odpoczynku.Powtórz procedurę mycia 5 razy.
6. Dodaj 50 μl odczynnika HRP-Conjugate do każdego dołka z wyjątkiem ślepego dołka kontrolnego.
7. Inkubacja zgodnie z opisem w kroku 3.
8. Pranie zgodnie z opisem w kroku 5.
9. Zabarwienie: Dodaj 50 μl roztworu chromogenu A i 50 μl roztworu chromogenu B do każdego dołka, wymieszaj delikatnie wstrząsając i inkubuj w temperaturze 37℃ przez 15 minut.Proszę unikać światła podczas barwienia.
10. Zakończenie: dodaj 50 μl roztworu zatrzymującego reakcję do każdego dołka, aby zakończyć reakcję.Kolor w dołku powinien zmienić się z niebieskiego na żółty.
11. Odczytaj absorbancję OD przy 450 nm za pomocą czytnika płytek Microtiter Plate Reader.Wartość OD ślepej studzienki kontrolnej jest ustawiona na zero.Test należy przeprowadzić w ciągu 15 minut po dodaniu roztworu zatrzymującego.
Precyzja
Precyzja wewnątrztestowa (precyzja w ramach testu): 3 próbki z niskim, średnim i wysokim poziomem E-Cad zostały przetestowane 20 razy na jednej płytce, odpowiednio.
Precyzja między testami (precyzja między testami): 3 próbki z niskim, średnim i wysokim poziomem E-Cad przetestowano na 3 różnych płytkach, po 8 powtórzeń na każdej płytce.
CV(%) = SD/średnia X100
Wewnątrz testu: CV<10%
Między testami: CV<12%
Zakres testu
0,6 pg/ml -80 pg/ml
Wrażliwość:
0,1 pg/ml
Osoba kontaktowa: Mr. Steven
Tel: +8618600464506
