Zestaw Sandwich 8-OHdG ELISA Zestaw testowy myszy 8-hydroksydeoksyguanozyny

Zestaw 8-hydroksy-dezoksyguanozyny mysiej; 8-OHdG ELISA Kit

• Nasz zestaw Mysiej 8-hydroksy-dezoksyguanozyny (8-OHdG) ELISA służy do oznaczania poziomu 8-OHdG w mysiej surowicy, osoczu, pożywce hodowlanej lub dowolnym płynie biologicznym.

Zasada

  Ten zestaw ELISA wykorzystuje metodę Sandwich-ELISA.Dostarczona w tym zestawie płytka Microelisa została wstępnie pokryta przeciwciałem specyficznym dla 8-OHdG.Standardy lub próbki są dodawane do odpowiednich studzienek płytki Microelisa i łączone ze specyficznym przeciwciałem.Następnie do każdego dołka płytki paskowej Microelisa dodaje się przeciwciało skoniugowane z peroksydazą chrzanową (HRP) swoiste wobec 8-OHdG i inkubuje.Wolne składniki są wypłukiwane.Do każdego dołka dodaje się roztwór substratu TMB.Tylko te dołki, które zawierają przeciwciało 8-OHdG sprzężone z 8-OHdG i HRP będą miały kolor niebieski, a następnie zmienią kolor na żółty po dodaniu roztworu zatrzymującego reakcję.Gęstość optyczną (OD) mierzy się spektrofotometrycznie przy długości fali 450 nm.Wartość OD jest proporcjonalna do stężenia 8-OHdG.Stężenie 8-OHdG w próbkach można obliczyć porównując OD próbek z krzywą standardową.

Materiały dostarczone z zestawem

• Rozcieńczenie standardów

Dziesięć studzienek jest ustawionych na standardy w płytce paskowej Microelisa.W studzience 1 i studzience 2 dodaje się 100 μl roztworu standardowego i 50 μl buforu rozcieńczenia standardowego i dobrze miesza.W studzience 3 i studzience 4 dodaje się odpowiednio 100 μl roztworu ze studzienki 1 i studzienki 2.Następnie dodaje się 50 μl buforu do rozcieńczeń standardowych i dobrze miesza.50 μl roztworu odrzucono z dołka 3 i dołka 4. Do dołka 5 i dołka 6 dodano odpowiednio 50 μl roztworu z dołka 3 i dołka 4.Następnie dodaje się 50 μl buforu do rozcieńczeń standardowych i dobrze miesza.Do dołka 7 i dołka 8 dodaje się odpowiednio 50 μl roztworu z dołka 5 i dołka 6.Następnie dodaje się 50 μl buforu do rozcieńczeń standardowych i dobrze miesza.W studzience 9 i studzience 10 dodaje się odpowiednio 50 μl roztworu ze studzienki 7 i studzienki 8.Następnie dodaje się 50 μl buforu do rozcieńczeń standardowych i dobrze miesza.50 μl roztworu usuwa się ze studzienek 9 i 10. Po rozcieńczeniu całkowita objętość we wszystkich studzienkach wynosi 50 μl, a stężenia wynoszą 900 pg/ml, 600 pg/ml, 300 pg/ml, 150 pg/ml i 75 pg/ml , odpowiednio.

Obliczanie wyników

Znane stężenia mysiego standardu 8-OHdG i odpowiadające mu odczyty OD wykreślono odpowiednio na skali logarytmicznej (oś x) i skali logarytmicznej (oś y).Stężenie mysiego 8-OHdG w próbce określa się przez wykreślenie OD próbki na osi Y.Pierwotne stężenie oblicza się mnożąc współczynnik rozcieńczenia.

Precyzja

Precyzja wewnątrztestowa (Precyzja w ramach testu): 3 próbki z niskim, średnim i wysokim poziomem mysiego 8-OHdG przetestowano 20 razy odpowiednio na jednej płytce.

Precyzja między testami (precyzja między testami): 3 próbki z niskim, średnim i wysokim poziomem mysiego 8-OHdG testowano na 3 różnych płytkach, po 8 powtórzeń na każdej płytce.

CV(%) = SD/średnia X100

Wewnątrz testu: CV<10%

Między testami: CV<12%

Zakres testu

15 pg/ml- 1000 pg/ml

Wrażliwość:

4,5 pg/ml