Mysz Estradiol Elisa Kit Rat E2 RUO Test Kit 48 studzienek i 96 studzienek

Szczur Estradiol, zestaw E2 ELISA

Uwagi:

• Ekstrakcję próbki i test ELISA należy przeprowadzić jak najszybciej po pobraniu próbki.Próbki należy pobrać zgodnie z odpowiednią literaturą.Jeśli testu ELISA nie można wykonać natychmiast, próbki można przechowywać w temperaturze -20 ℃. Należy unikać powtarzających się cykli zamrażania-rozmrażania.
• Nasze zestawy nie mogą być używane do próbek z NaN3, które mogą hamować aktywność HRP.

Materiały dostarczone z zestawem

Procedura

Rozcieńczenie standardów

1.Dziesięć dołków jest ustawionych na standardy w płytce do pasków Microelisa.W studzience 1 i studzience 2 dodaje się 100 μl roztworu standardowego i 50 μl buforu rozcieńczenia standardowego i dobrze miesza.W studzience 3 i studzience 4 dodaje się odpowiednio 100 μl roztworu ze studzienki 1 i studzienki 2.Następnie dodaje się 50 μl buforu do rozcieńczeń standardowych i dobrze miesza.50 μl roztworu odrzucono z dołka 3 i dołka 4. Do dołka 5 i dołka 6 dodano odpowiednio 50 μl roztworu z dołka 3 i dołka 4.Następnie dodaje się 50 μl buforu do rozcieńczeń standardowych i dobrze miesza.Do dołka 7 i dołka 8 dodaje się odpowiednio 50 μl roztworu z dołka 5 i dołka 6.Następnie dodaje się 50 μl buforu do rozcieńczeń standardowych i dobrze miesza.W studzience 9 i studzience 10 dodaje się odpowiednio 50 μl roztworu ze studzienki 7 i studzienki 8.Następnie dodaje się 50 μl buforu do rozcieńczeń standardowych i dobrze miesza.50 μl roztworu usuwa się ze studzienek 9 i 10. Po rozcieńczeniu całkowita objętość we wszystkich studzienkach wynosi 50 μl, a stężenia wynoszą 120 pg/ml, 80 pg/ml, 40 pg/ml, 20 pg/ml i 10 pg/ml , odpowiednio

2. W płytce testowej Microelisa pozostawić pusty dołek jako kontrolę ślepą.Do dołków na próbki dodaje się 40 μl buforu rozcieńczającego próbki i 10 μl próbki (współczynnik rozcieńczenia wynosi 5).Próbki należy umieszczać na dnie bez dotykania ścianki studzienki.Dobrze wymieszaj, delikatnie wstrząsając.

3. Inkubacja: inkubuj 30 min w 37 ℃ po uszczelnieniu membraną do płytki zamykającej.

4. Rozcieńczanie: rozcieńczyć stężony bufor do płukania wodą destylowaną (30 razy dla 96T i 20 razy dla 48T).

5. Mycie: ostrożnie odkleić membranę płytki zamykającej, zaaspirować i ponownie napełnić roztworem myjącym.Wyrzucić roztwór myjący po 30 sekundach odpoczynku.Powtórz procedurę mycia 5 razy.

6. Dodaj 50 μl odczynnika HRP-Conjugate do każdego dołka z wyjątkiem ślepego dołka kontrolnego.

7. Inkubacja zgodnie z opisem w kroku 3.

8. Pranie zgodnie z opisem w kroku 5.

9. Zabarwienie: Dodaj 50 μl roztworu chromogenu A i 50 μl roztworu chromogenu B do każdego dołka, wymieszaj delikatnie wstrząsając i inkubuj w temperaturze 37℃ przez 15 minut.Proszę unikać światła podczas barwienia.

10. Zakończenie: dodaj 50 μl roztworu zatrzymującego reakcję do każdego dołka, aby zakończyć reakcję.Kolor w dołku powinien zmienić się z niebieskiego na żółty.

11. Odczytaj absorbancję OD przy 450 nm za pomocą czytnika płytek Microtiter Plate Reader.Wartość OD ślepej studzienki kontrolnej jest ustawiona na zero.Test należy przeprowadzić w ciągu 15 minut po dodaniu roztworu zatrzymującego.

Precyzja

Precyzja wewnątrztestowa (Precyzja w ramach testu): 3 próbki o niskim, średnim i wysokim poziomie E2 zbadano odpowiednio 20 razy na jednej płytce.

Precyzja między testami (precyzja między testami): 3 próbki o niskim, średnim i wysokim poziomie E2 przetestowano na 3 różnych płytkach, po 8 powtórzeń na każdej płytce.

CV(%) = SD/średnia X100

Wewnątrz testu: CV<10%

Między testami: CV<12%

Zakres testu

1,8 pg/ml -150 pg/ml