Podjednostka receptora interleukiny-2 Alpha Mouse IL2R CD25 IL2-RA ELISA Kit

Podjednostka alfa receptora mysiej interleukiny-2;IL2R;CD25;Zestaw IL2-RA ELISA

Materiały dostarczone z zestawem

Wymagania dotyczące próbek

• serum-koagulacja w temperaturze pokojowej 10-20 min, wirowanie 20 min przy prędkości 2000-3000 obr/min usunąć supernatant, jeśli pojawił się osad, ponownie odwirować.
• osocze-użyj odpowiedniego osocza EDTA lub cytrynianowego jako antykoagulantu, wymieszaj 10-20 min, wiruj 20 min przy prędkości 2000-3000 rpm usuń supernatant, jeśli pojawił się osad, ponownie odwiruj.
• Mocz-pobrać do sterylnego pojemnika, wirować 20 min przy prędkości 2000-3000 obr/min usunąć supernatant, jeśli pojawił się osad, ponownie odwirować.Operacja hydrothorax i płynu mózgowo-rdzeniowego Odniesienie do tego.
• supernatant hodowli komórkowej-wykrywać składniki wydzielnicze, pobierać do sterylnego pojemnika, wirować 20 min przy prędkości 2000-3000 obr/min usunąć supernatant, określać skład komórek, Zawiesina komórek rozcieńczyć PBS (PH7,2-7,4), Stężenie komórek osiągnęło 1 mln /ml, powtarzane cykle zamrażania-rozmrażania, uszkadzanie komórek i uwalnianie składników wewnątrzkomórkowych, wirowanie 20 min przy prędkości 2000-3000 obr/min usunąć supernatant. Jeśli pojawił się osad, ponownie odwirować.
• Próbki tkanek- Po pocięciu próbek sprawdź wagę, dodaj PBS (PH7,2-7,4), Szybko zamroź ciekłym azotem, utrzymuj próbki w temperaturze 2-8 ℃ po stopieniu, dodaj PBS (PH7,4), Homogenizowany ręcznie lub szlifierkami, wirowanie 20 min przy prędkości 2000-3000 obr/min usunąć supernatant.
• jak najszybciej po pobraniu próbki i zgodnie z odpowiednią literaturą, należy przeprowadzić eksperyment jak najszybciej po ekstrakcji.Jeśli nie, próbkę można przechowywać w temperaturze -20 ℃, aby zachować. Należy unikać powtarzających się cykli zamrażania-rozmrażania.
• Nie można wykryć próbki zawierającej NaN3, ponieważ NaN3 hamuje aktywność HRP.

Zasada

Ten zestaw ELISA wykorzystuje metodę Sandwich-ELISA.Dostarczona w tym zestawie płytka Microelisa została wstępnie pokryta przeciwciałem specyficznym dla:IL2R.Standardy lub próbki są dodawane do odpowiednich studzienek płytki Microelisa i łączone ze specyficznym przeciwciałem.Następnie przeciwciało skoniugowane z peroksydazą chrzanową (HRP) swoiste dlaIL2Rdodaje się do każdego dołka płytki paskowej Microelisa i inkubuje.Wolne składniki są wypłukiwane.Do każdego dołka dodaje się roztwór substratu TMB.Tylko te studnie, które zawierająIL2Roraz przeciwciało trombomoduliny sprzężone z HRP będą miały kolor niebieski, a następnie zmienią kolor na żółty po dodaniu roztworu zatrzymującego reakcję.Gęstość optyczną (OD) mierzy się spektrofotometrycznie przy długości fali 450 nm.Wartość OD jest proporcjonalna do stężeniaIL2R.Możesz obliczyć stężenieIL2Rw próbkach, porównując OD próbek z krzywą standardową.

Uwagi:

• Po otrzymaniu zestaw należy przechowywać w temperaturze 4°C. Przed wykonaniem testu zestaw należy doprowadzić do temperatury pokojowej.Usuń wszelkie niepotrzebne paski z płytki pokrytej przeciwciałem IL2R, zamknij je ponownie folią zip-lock i przechowuj w temperaturze 4°C.
• W stężonym buforze myjącym mogą pojawić się osady.Proszę podgrzać bufor, aby rozpuścić wszystkie osady, co nie wpłynie na wyniki.
• Aby uniknąć błędu eksperymentalnego, należy używać dokładnej pipety.Próbki należy dodać do mikropłytki w czasie krótszym niż 5 minut.Jeśli dołączona jest duża liczba próbek, zalecana jest pipeta wielokanałowa.
• W każdym teście należy uwzględnić krzywą standardową.Zaleca się powielenie studzienek.Jeśli wartość OD próbki jest większa niż pierwsza studzienka standardów, przed testem należy rozcieńczyć próbkę (n razy).Przy obliczaniu pierwotnego stężenia trombomoduliny należy pomnożyć całkowity współczynnik rozcieńczenia (XnX5).
• Aby uniknąć zanieczyszczenia krzyżowego, uszczelniacze Microplate są przeznaczone wyłącznie do jednorazowego użytku.
• Proszę trzymać Substrat z dala od światła.
• Wszystkie operacje powinny być ściśle zgodne z instrukcjami producenta.Wyniki określone przez czytnik płytek mikrotitracyjnych.
• Wszystkie próbki, bufor płuczący i odpady należy traktować jako czynniki zakaźne.
• Nie należy mieszać odczynników z różnych partii.