Zestaw testowy mysiego Ifn Gamma RUO Myszy interferon Gamma Sandwich Method

Mysi interferon γ;interferon gamma;IFN-γ;IFN-gamma;IFNG;zestaw ELISA

Do ilościowego oznaczania in vitro stężeń interferonu γ(IFN-γ) w surowicy myszy, osoczu, pożywkach hodowlanych lub dowolnym płynie biologicznym.

Zasada

Ten zestaw ELISA wykorzystuje metodę Sandwich-ELISA.Dostarczona w tym zestawie płytka Microelisa została wstępnie pokryta przeciwciałem specyficznym dla IFN-γ.Standardy lub próbki są dodawane do odpowiednich studzienek płytki Microelisa i łączone ze specyficznym przeciwciałem.Następnie do każdej studzienki płytki paskowej Microelisa dodaje się przeciwciało skoniugowane z peroksydazą chrzanową (HRP) swoiste dla IFN-y i inkubuje.Wolne składniki są wypłukiwane.Do każdego dołka dodaje się roztwór substratu TMB.Tylko te studzienki, które zawierają przeciwciało IFN-γ sprzężone z IFN-γ i HRP będą miały kolor niebieski, a następnie zmienią kolor na żółty po dodaniu roztworu zatrzymującego.Gęstość optyczną (OD) mierzy się spektrofotometrycznie przy długości fali 450 nm.Wartość OD jest proporcjonalna do stężenia IFN-γ.Stężenie IFN-γ w próbkach można obliczyć porównując OD próbek z krzywą standardową.

Materiały dostarczone z zestawem

• Rozcieńczenie standardów

Dziesięć studzienek jest ustawionych na standardy w płytce paskowej Microelisa.W studzience 1 i studzience 2 dodaje się 100 μl roztworu standardowego i 50 μl buforu rozcieńczenia standardowego i dobrze miesza.W studzience 3 i studzience 4 dodaje się odpowiednio 100 μl roztworu ze studzienki 1 i studzienki 2.Następnie dodaje się 50 μl buforu do rozcieńczeń standardowych i dobrze miesza.50 μl roztworu odrzucono z dołka 3 i dołka 4. Do dołka 5 i dołka 6 dodano odpowiednio 50 μl roztworu z dołka 3 i dołka 4.Następnie dodaje się 50 μl buforu do rozcieńczeń standardowych i dobrze miesza.Do dołka 7 i dołka 8 dodaje się odpowiednio 50 μl roztworu z dołka 5 i dołka 6.Następnie dodaje się 50 μl buforu do rozcieńczeń standardowych i dobrze miesza.W studzience 9 i studzience 10 dodaje się odpowiednio 50 μl roztworu ze studzienki 7 i studzienki 8.Następnie dodaje się 50 μl buforu do rozcieńczeń standardowych i dobrze miesza.50 μl roztworu usuwa się ze studzienek 9 i 10. Po rozcieńczeniu całkowita objętość we wszystkich studzienkach wynosi 50 μl, a stężenia wynoszą 180 pg/ml, 120 pg/ml, 60 pg/ml, 30 pg/ml i 15 pg/ml, odpowiednio.

Obliczanie wyników

Znane stężenia mysiego standardu IFN-y i odpowiadające mu odczyty OD wykreślono odpowiednio na skali logarytmicznej (oś x) i skali logarytmicznej (oś y).Stężenie mysiego IFN-γ w próbce określa się przez wykreślenie OD próbki na osi Y.Pierwotne stężenie oblicza się mnożąc współczynnik rozcieńczenia.

Precyzja

Precyzja wewnątrztestowa (Precyzja w ramach testu): 3 próbki z niskim, średnim i wysokim poziomem mysiego IFN-γ testowano 20 razy na jednej płytce, odpowiednio.

Precyzja między testami (precyzja między testami): 3 próbki z niskim, średnim i wysokim poziomem mysiego IFN-γ testowano na 3 różnych płytkach, po 8 powtórzeń na każdej płytce.

CV(%) = SD/średnia X100

Wewnątrz testu: CV<10%

Między testami: CV<12%

Zakres testu

3 pg/ml-200 pg/ml

Wrażliwość:

0,8 pg/ml