Zestaw badawczy TNF-α Elisa

Celem zastosowania

Ten zestaw służy do określania stężeń TNF- α w ludzkich supernatatach kultur komórkowych.

Procedura oceny

1Rozcieńczenie i dodanie próbki:Rozcieńczenie Gęstość oryginalna Standardowa w tabeli poniżej: 400ng/L 5 Standard 150μl Original density Standard+150μl Standard diluent 200ng/L 4 Standard 150μl 5 Standard+150μl Standard diluent 100ng/L 3 Standard 150μl 4 Standard+150μl Standard diluent 50ng/L 2 Standard 150μl 3 Standard +150μl Standard diluent 25ng/L 1 Standard 150μl 2 Standard +150μl Standard diluent

2.dodawanie próbki:zostawić próby próby oddzielnie (próbki próby próby próby i reagentu HRP-Conjugate nie są dodawane, inaczej każda operacja jest taka sama).Dodać 50 μl standardowego do Microelisa stripplateNastępnie dodaj próbkę testową o rozcieńczeniu 10 μl (ostatnia rozcieńczenie próbki wynosi 5-krotność), dodaj próbkę do próbki, nie dotykaj ściany w miarę możliwości i delikatnie mieszaj.

3.Inkubacja: Po zamknięciu płyty membranową, inkubacja trwa 30 min w temperaturze 37°C.

4.Konfigurować płyn: 30- lub 20-krotny roztwór do prania rozcieńczony 30- lub 20-krotnie wodą destylowaną i rezerwą.

5.prania: odkrycie membrany płytki zamknięcia, wyrzucenie płynu, suszenie po huśtawieniu, dodanie buforu do każdej wody, pozostawienie na 30 sekund, następnie odprowadzanie, powtórzenie 5 razy, suszenie po uderzeniu.

6.dodać enzym:dodać 50 μl odczynnika HRP-Conjugate do każdej wody, z wyjątkiem wody pustej.

7. Inkubacja: Operacja z 3.

8.prania: operacja z 5.

9.kolor:dodaje się roztwór chromogenu A 50ul i roztwór chromogenu B 50ul do każdej z komórek, omijając zachowanie światła przez 10 min w temperaturze 37°C

10.Zatrzymać reakcję:dodać 50 μl roztworu Stop do każdej dawki, zatrzymać reakcję ((kolor niebieski zmienia się na żółty).

11. badanie: przyjmowanie próbek w stanie pustej o wartości zerowej, odczytywanie absorbancji w temperaturze 450 nm po dodaniu roztworu stop i w ciągu 15 min.

Wymogi dotyczące próbek

1. wyciągać jak najszybciej po pobraniu próbki i zgodnie z odpowiednią literaturą, a eksperyment powinien być przeprowadzany jak najszybciej po wyciągnięciu.1 próbkę można przechowywać w temperaturze 20 °C w celu zachowaniaUnikać powtarzających się cykli zamrażania i roztopiania.

2Nie można wykryć próbki zawierającej NaN3, ponieważ NaN3 hamuje aktywność HRP.

Ważne uwagi

1. Zestaw należy wyjąć z chłodnicy i ustawić 15-30 minut w temperaturze pokojowej, płytki ELISA pokryte powłoką, jeśli nie zostały zużyte po otwarciu,Płytka powinna być przechowywana w zamkniętym worku.

2. bufor do mycia wil krystalizacja separacja, może być podgrzewana woda pomaga rozpuścić się po rozcieńczeniu.

3. dodawać próbkę z próbkarzem w każdym kroku, i często korygować jej dokładność, unikając błędów eksperymentalnych. dodać próbkę w ciągu 5 min, jeśli liczba próbek jest duża, zalecamy użycie Voley.

4Jeżeli zawartość materiału badanego jest zbyt wysoka (OD próbki jest większa niż pierwsza wartość standardowa), należy rozcieńczyć próbkę (n razy), rozcieńczyć i pomnożyć przez współczynnik rozcieńczania.(×n×5).

5- membrana płyty zamknięcia ogranicza tylko jednorazowe użycie, aby uniknąć zanieczyszczenia krzyżowego.

6Substrat unika ochrony świetlnej.

7W celu określenia wyników badań należy zastosować czytnik płytek mikrotytrowych jako standard.

8Wyniki, bufor do prania i każdy rodzaj odpadów powinny być stosowane zgodnie z procesem materiału zakaźnego.

9Nie mieszajcie odczynników z innych partii.