Zasada badania
Zestaw ten umożliwia określenie stężenia P53 w surowicy szczura, supernatach kultur komórkowych i innych płynach biologicznych.
Zestaw bada poziom ludzkiego CD16 w próbce, użyć oczyszczonego ludzkiego przeciwciała CD16 do pokrycia mikrotytrowych płytek, zrobić przeciwciało w fazie stałej, a następnie dodać CD16 do studni,Zespolone przeciwciała CD16 oznaczone HRPPo całkowitym umyciu, dodamy roztwór podłoża TMB, podłoże TMB staje się niebieskiego koloru.Reakcja kończy się dodaniem roztworu kwasu siarkowego, a zmiana koloru jest mierzona spektralnie na długości fali 450 nmNastępnie stężenie ludzkiego CD16 w próbkach określa się poprzez porównanie nadmiaru dawki w próbkach ze standardową krzywą.
Materiały dostarczone z kto
| 1 |
roztwór do prania |
20 ml × 1 butelka |
7 |
Zatrzymać rozwiązanie |
6 ml × 1 butelka |
| 2 |
Odczynnik konjugacji HRP |
6 ml × 1 butelka |
8 |
Standardowe ((20 μg/l) |
0.5 ml × 1 butelka |
| 3 |
Mikroelizowe paski |
Dwanaście razy osiem pasków |
9 |
Standardowy rozcieńczalnik |
1.5 ml × 1 butelka |
| 4 |
Rozcieńczalnik próbki |
6 ml × 1 butelka |
10 |
Instrukcja |
1 |
| 5 |
Roztwór chromogenu A |
6 ml × 1 butelka |
11 |
Membrana płyty zamknięcia |
2 |
| 6 |
Roztwór chromogenu B |
6 ml × 1 butelka |
12 |
Zapełnione torbami |
1 |
Wymogi dotyczące próbek
- W przypadku, gdy nie jest to możliwe, należy przeprowadzić eksperymenty w najkrótszym możliwym czasie po pobraniu próbki.próbkę można przechowywać w temperaturze -20 °C w celu zachowaniaUnikać powtarzających się cykli zamrażania i roztopiania.
- Nie można wykryć próbki zawierającej NaN3, ponieważ NaN3 hamuje aktywność HRP.
Procedura oceny
- Rozcieńczenie i dodanie próbki:Rozcieńczenie Pierwotna gęstość Standardowa zgodnie z poniższą tabelą:
| 10 μg/l |
5 Standardy |
150μl Gęstość pierwotna Standardowy+150μl Standardowy rozcieńczalnik |
| 5 μg/l |
4 Standardy |
150 μl 5 Standardowy+150 μl Standardowy rozcieńczalnik |
| 20,5 μg/l |
3 Standardy |
150 μl 4 Standardowy+150 μl Standardowy rozcieńczalnik |
| 10,25 μg/l |
2 Standardy |
150 μl 3 Standardowy + 150 μl Standardowy rozcieńczalnik |
| 00,625 μg/l |
1 Norma |
150 μl 2 Standardowy + 150 μl Standardowy rozcieńczalnik |
2.dodawanie próbki: Ustawić próby próby w próbie próby oddzielnie (w próbach próby próby próby próby próby nie dodaje się próby i reagentu HRP-Conjugate, inaczej każda operacja jest taka sama).Dodać 50 μl standardowego do Microelisa stripplate, dodaj rozcieńczenie próbki 40μl do studni próbki badawczej, następnie dodaj próbkę badawczą 10μl (ostatnia rozcieńczenie próbki wynosi 5 razy), dodaj próbkę do studni, nie dotykaj ściany studni tak daleko, jak to możliwe, i delikatnie mieszaj.
3.Inkubacja: Po zamknięciu płyty membranową, inkubacja trwa 30 min w temperaturze 37°C.
4.Konfigurować płyn: 30- lub 20-krotny roztwór do mycia, rozcieńczony 30- lub 20-krotnie wodą destylowaną i rezerwą.
5.prania: Odkrycie membrany płytki zamknięcia, wyrzucenie płynu, suszenie za pomocą huśtawki, dodanie buforu do każdej studni, pozostawienie na 30 sekund, następnie odprowadzanie, powtórzenie 5 razy, suszenie za pomocą pat.
6.dodać enzym:dodać 50 μl odczynnika HRP-Conjugate do każdej studni, z wyjątkiem studni pustej.
7. Inkubacja: Operacja z 3.
8.prania: operacja z 5.
9.kolor:dodaje się roztwór chromogenu A 50ul i roztwór chromogenu B 50ul do każdej studni, unikając konserwacji światła przez 15 min w temperaturze 37°C
10.Zatrzymać reakcję:dodaj 50 μl roztworu Stop do każdej studni, zatrzymaj reakcję ((niebieski kolor zmienia się na żółty).
11. badanie: wziąć pustą studnię na poziomie zerowym, odczytać absorbancję w temperaturze 450 nm po dodaniu roztworu stop i w ciągu 15 min.
Twoja wiadomość musi mieć od 20 do 3000 znaków!
